Probleme der genetischen Methode
Kontamination und carry-over
abrolute number of reads per Taxon
120000
100000 ]
80000 —
60000 —
40000 +
20000 +
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vv
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absolute number of ASVs per Taxon
no_match
|_| Amphibalanus improvisus
'__ | Balanus crenatus
+ Cladosporium cladosporioides
Homo sapiens
Mytilus trossulus
— Acartia (Acanthacartia}) tonsa
Mnemiopsis leidyi
_ Mytilus edulis
ı_| Nais elinguis
Clava multicornis
4ediste diversicolor
Melita nitida
Microsiphona potamos
Mya arenaria
__ Pleopis polyphemoides
. ‚ Polydora cornuta
„ Rhithropanopeus harrisii
—__] Skeletonema costatum
ı_ | Skeletonema marinoi
Acartia (Acartiura) hudsonica
m Alitta succinea
{ Amathia gracilis
Apocoarophium lacustre
\. ' Aptinothrips rufus
Balanus balanus
_ . Baltidrilus costatus
ı_ | Callithamnion corymbosum
Canis lupus
Chorda filum
„ Cladosporium sphaerospermurr
l_ | Delia platura
'_ | Eurytemora affinis affinis
ı_ | Gaillona rosea
ı__ | Gammarus oceanicus
Gammarus salinus
_ | Gammarus tigrinus
Gammarus zaddachi
Gonothyraea loveni
Hemigrapsus takanoi
Kryptoperidinium triquetrum
"| Leathesia marina
Lumbricillus rivalis
'_ | Macrostomum hystrix
Monocorophium insidiosum
Mytilopsis leucophaeata
„| Palaemon elegans
- Paranais botniensis
Paranais litoralis
Penicillium solitum
Pseudogymnoascus pannorum
i_ | Salmo salar
7 Squamamoeba japonica
Thalassiosira pseudonana
‘1A Expertennetzwerk
Wissen Können Handeln
1.) Nach dem Mixen wurde für die DNA-
Extraktion der Proben 666 ul verwendet, bei
den Kontrollproben hingegen wurden 500 ml
Ethanol filtriert. Das ist also etwa 750fach mehr
Volumen bei den Kontrollproben. Um die
Anzahl der reads vergleichen zu können
mussten sie also durch 750 geteilt werden. Die
häufigste Art in den _Kontroll-Proben
(Amphibalanus improvisus) hätte also nach
dieser Korrektur nur noch 245 reads insgesamt
(6 Kontroll-Proben) oder 40 reads in einer
Probe.
2.) Die PCR-Reaktion ist eine kompetitive
Reaktion. Bei der PCR bindet der Primer am
ehesten an den Sequenzen der häufigsten
Arten im Template. Da die Reaktion
exponentiell abläuft, werden nach wenigen
Zyklen nur noch die häufigsten weiter
amplifiziert. In eine Kontroll-Probe, die aus
reinem Ethanol besteht, werden die Rest DNA-
Spuren in Abwesenheit von einem anderen
Template amplifiziert. Würde man diese
Spuren aber zu einem Template hinzufügen,
das reich an DNA ist (wie unsere
Sportbootsproben), würden diese Spuren im
Template numerisch untergehen und
wahrscheinlich keinen Einfluss auf das
Endergebnis haben. 44