A Expertennetzwerk
Wissen Können Handeln
Methoden
2. DNA- Extraktion
Von jeder Probe wurden 3 x 336 UL Homogenisat in ein 7,5 mL
Eppendorf Tube pipettiert.
Diese wurden in der SpeedVac Zentrifuge bei 60°C unter
Vakuum gesetzt und für 2 Stunden zentrifugiert, bis der ganze
Ethanol verdunstet war und die Probe getrocknet als Pellet
vorlag.
Methoden
3. PCR Gen Amplifikation
Ziel der PCR-Reaktion ist es einen Genabschnitt,
hier ein Fragment des mitochondrialen COI Gens,
zu amplifizieren. Dafür wurden die Primer
mICOlintF und jgHCO2198 benutzt. Primer
wurden mit dem Illumina Overhang bestellt.
Die DNA-Extraktion erfolgte in denselben Eppendorf Tubes mit
dem DNeasy PowerSoil Pro Kit (Qiagen) nach den Angaben des
Herstellers. Die Inkubation mit Proteinase K erfolgte bei 37 °C
über Nacht (+18 h).
Melt Peak
400
300
yo
DB
35
u
X 200
-]
100
0
4)
30
Temperature, Celsius
18